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prettyshine
Nuovo Arrivato
Città: Napoli
75 Messaggi |
 Inserito il - 13 giugno 2012 : 11:06:55
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Ragazzi buongiorno, sto studiando per un esame di biochimica delle fermentazioni e non mi è molto chiaro la prooduzione dell'insulina ricombinante da parte del lievito...ovviamente il processo comincia cn lo scegliere il gene di interesse, spesso umano, adattarlo sul vettore di espressione e inglobarlo nella cellula, in qst caso il lievito, attraverso clonazione o integrazione genica. una volta fatto questo le cellule di lievito crescono in un fermentatore e sono poi centrifugate per recuperare l'insulina prodotta. il centrifugato viene sottoposto a cromatografia a scambio cationico e a ph acidi si avrà la separazione dell'insulina sulla fase stazionaria mentre a ph basici verrà eluita. una volta eluita sarà filtrata x eliminare dei contaminanti, isolata e ci sarà precipitazione cn etanolo. a questo punto si filtra di nuovo il composto e avrà una purezza del 90%; questo valore nn è ancora sufficiente e quindi avremo una transpeptidazione e cioè sostituzione del transpeptide sulla catena esterea cn una treonina B30, successiva elettroforesi, diversi cicli di HPLC e infine filtrazione e liofilizzazione fino ad arrivare alla insulina umana cn una purezza > al 99.5%..l'insulina nel lievito ha 3 aa al posto del peptide C e la sua sintesi prevede la formazione di una sola catena, a differenza dell'E.coli in cui si formano le catene A e B..
è giusto? vi prego datemi una mano, ho l'esame lunedì e ho questo dubbio..grazie mille a tutti coloro ke risponderanno..
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prettyshine
Nuovo Arrivato
Città: Napoli
75 Messaggi |
 Inserito il - 14 giugno 2012 : 17:26:02
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| per cortesia qualcun mi può aiutare? :( |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 14 giugno 2012 : 18:04:42
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| Neppure io, magari qualcuno di biotech... |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
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prettyshine
Nuovo Arrivato
Città: Napoli
75 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2012 : 07:15:16
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| grazie mille a tutti =) |
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insulina ricombinante S.cereviasiae
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