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Iside
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 Inserito il - 21 febbraio 2007 : 18:56:35
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ciao ragazzi...avrei bisogno del vostro aiuto!vengo da un esame finito alle 16.00 e domani devo partire con un'immunoprecipitazione...non mi trovo con dei calcoli e speravo che qualche mente superiore potesse darmi una mano
allora, il fatto è:devo stimolare delle cellule con 100 ng di EGF, per un esperimento, e con EGF 16nM, in un altro! purtroppo la persona ch ha fatto questo esperimento prima di me è andata via dal lab ed è sparita dalla circolazione , e io adesso non riesco a risalire a quanti nanogrammi corrisponde EGF 16nM.
allora, il mio EGF stock è 100 microg/microl, quindi, considerando una piastra da 2 ml, per stimolare con 100ng di EGF dovrò inserire 2microl di stock in ogni piastra. e fin quì la mente pare funzionare ancora...ma poi? per avere EGF 16nM, quanti microlitri di stock devo usare in una piastra da 2 ml?
non so se sono fusa a causa dell'esame o mi sono rincretinita, ma i calcoli che faccio mi sembrano davvero assurdi...chi mi aiuta, pls?
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Giuliano652
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Iside
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 Inserito il - 21 febbraio 2007 : 21:28:30
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hai ragione giuliano, ci pensavo mentre cenavo
allora, sul data sheet, ho controllato oggi, non riporta il PM dell'EGF, ma solo la sequenza aminoacidica, da cui cmq sarebbe possibile ricavare il PM. in ogni caso facendo un po' di ricerche su internet ho trovato che il PM dell'hEGF dovrebbe essere approssimativamente 6400 dalton...in ogni caso, considerando questo PM, mi spiegheresti il procedimento? io con i miei calcoli mi trovo che la concentrazione 16nM equivale a 100ng di EGF:quindi, se hi fatto bene, ma non penso, i due esperimenti dovrebbero essere fatti con la stessa concentrazione di citochina... |
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Giuliano652
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Iside
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Inserito il - 22 febbraio 2007 : 14:45:00
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| ho rifatto i calcoli a mente fredda e mi trovo con te, 102 microgrammi. ma mi sembra assurdo...io ho comprato uno stock 100microg/ml...dovrei usarlo tutto e manco mi basterebbe! |
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Giuliano652
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Iside
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Inserito il - 22 febbraio 2007 : 16:13:53
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mi sta frullando per la mente una cosa...ma il PM dell'EGF come dev'essere espresso? in Da on in KDa? prova a fare i calcoli considerando il PM 6.4...
ps:cmq grazie per l'aiuto
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Giuliano652
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