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Tag   concentrazione    assorbanza    biorad    retta di taratura  Aggiungi Tag

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hiero
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Inserito il - 18 gennaio 2014 : 16:53:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di hiero Invia a hiero un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
salve a tutti.
metto in allegato un esercizio.
Vorrei capire come faccio a calcolarmi la concentrazione di standard nelle provette e poi, una volta costruita la retta di taratura
come trovarmi il valore preciso della concentrazione del campione corrispondente all'assorbanza.

grazie anticipatamente.

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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


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Inserito il - 18 gennaio 2014 : 18:01:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
come faccio a calcolarmi la concentrazione di standard nelle provette

http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/ (o un qualsiasi libro di chimica, veramente)

Citazione:
una volta costruita la retta di taratura come trovarmi il valore preciso della concentrazione del campione corrispondente all'assorbanza

Una volta che hai l'equazione della retta (concentrazione = a * assorbanza + b) sostituisci il tuo valore di assorbanza e trovi la concentrazione. Se cerchi nel forum l'argomento è già stato trattato più volte (e sono sicuro al 95% di aver messo anche dei grafici con calcoli e tutto...)

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hiero
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28 Messaggi

Inserito il - 19 gennaio 2014 : 18:10:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di hiero Invia a hiero un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
standard 0,125 mg/ml sarebbe la concentrazione di standard in un ml?

ad ogni modo le concentrazioni che mi sono ottenuto sono

provetta 2-3--->0,0025 mg/ml
provetta 4-5--->0,005 mg/ml
provetta 6-7--->0,0075 mg/ml
provetta 8-9--->0,01 mg/ml

sono giuste?
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 19 gennaio 2014 : 18:51:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ti sei perso un fattore 10...

Ad es: provetta 4-5

- lo standard è 0.125 mg/ml
- ne prendi 0.040 ml, quindi 0.125 mg/ml * 0.040 ml = 0.005 mg
- il volume finale sarà di 0.04 + 0.06 = 0.1 ml
- la concentrazione sarà di 0.005 ml / 0.1 ml = 0.05 mg/ml

Oppure, ragionamento alternativo

- metti 0.040 ml di standard in 0.1 ml di volume finale, si tratta quindi di una diluizione 1:2.5 (=0.1/0.04)
- lo standard è 0.125 mg/ml, quindi diluito 1:2.5 sarà 0.125/2.5 = 0.05 mg/ml

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hiero
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28 Messaggi

Inserito il - 19 gennaio 2014 : 19:39:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di hiero Invia a hiero un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
poi mi dovrò costruire la retta. il procedimento è questo(correggimi se sbaglio):

calcolare le assorbanze
riportare sul grafico i punti noti (assorbanza vs concentrazione)
trovare l'equazione della retta (retta passante per 2 punti)e quindi trovarmi per interpolazione la concentrazione del campione di cui conosciamo solo l'assorbanza.
Giusto?
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 19 gennaio 2014 : 19:46:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Esatto, tranne questo:

Citazione:
trovare l'equazione della retta (retta passante per 2 punti)

di punti ne hai 4...

Di solito si usa il metodo dei minimi quadrati.

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hiero
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Inserito il - 19 gennaio 2014 : 19:48:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di hiero Invia a hiero un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
non basta prendere 2 punti a caso dei 4?
se non ti chiedo troppo potresti farmi un esempio con il metodo dei minimi quadrati? leggendo su wikipedia ci ho capito ben poco.
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 19 gennaio 2014 : 21:39:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
non basta prendere 2 punti a caso dei 4?

Beh, allora che ne prendi a fare 4?

Per i minimi quadrati se non hai voglia di fare i calcoli a mano puoi farlo in Excel o Calc (non le sole opzioni, ma vanno più che bene in questo caso).

La cosa è stata spiegata molte volte, cerca "retta di taratura" o "curva standard" e troverai un sacco di discussioni
http://www.molecularlab.it/forum/search.asp

Ad es questa
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=1378
oppure questa
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=29589
o questa
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=3661

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hiero
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Inserito il - 20 gennaio 2014 : 16:58:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di hiero Invia a hiero un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
i minimi quadrati è il metodo più semplice?
purtroppo l'esame non prevede l'uso di excel.
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 20 gennaio 2014 : 19:41:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
I minimi quadrati è il metodo (o uno dei metodi) più corretto ed è quello che si usa nella realtà.

Cosa vogliano sapere all'esame non so dirti... dovresti chiederlo al prof!

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