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mari82
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22 Messaggi

Inserito il - 07 marzo 2007 : 11:17:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mari82 Invia a mari82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti,
sono nuova del forum e vedo che qui ci sono molte persone esperte in colture cellulari. Sto portando avanti la linea cellulare Jurkat (cellule in sospensione), ma ho dei problemi. Ieri ho scongelato le cellule e oggi ho visto che non stanno bene...tendono ad aderirsi alla fiasca e a formare dei gruppi. Sto cercando di capire quale sia il problema, il terreno di coltura che sto usando è l'RPMI1640 che contiene FBS al 10%, PenStrep all'1%, L-Glu all'1%, Mem non essential amminoacido all'1%. Ora ho messo il terreno in una piastra da 60 x vedere se è contaminato.
C'è qualcuno che ha lavorato su questa linea cellulare? Avete un'idea di quale sia il problema? X le linee cellulari in sospensione, la fiasca va messa nell'incubatore sdraiata o in piedi?
Grazie mille
Buona giornata
Marianna

Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6922 Messaggi

Inserito il - 07 marzo 2007 : 21:24:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Fai tutto come facevo io... Non saprei, mi viene in mente solo di chiederti quante volte la vial di cellule che stai usando è stata congelata e scongelata... forse sono semplicemente vecchie

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mari82
Nuovo Arrivato



22 Messaggi

Inserito il - 07 marzo 2007 : 22:10:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mari82 Invia a mari82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille x la tua risposta. Purtroppo non ho idea di quanti passaggi abbiano subito queste cellule, anche perchè lavoro da poco in questo lab e non so nulla di cosa sia stato fatto in precedenza...
Oggi pomeriggio le cellule stavano meglio... può darsi che quelle che mi sembravano cellule adese alla parete della fiasca siano in realtà cellule morte sedimentate, anche perchè spipettando un po' il mezzo si sono staccate. Ti sembra possibile?
Tu preparavi il terreno nello stesso modo?
Ciao
Marianna
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Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6922 Messaggi

Inserito il - 08 marzo 2007 : 09:29:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Il mio terreno era come il tuo, l'unica differenza era la penstrep che non la mettevo (la filosofia di chi mi seguiva era: "tanto l'effetto dura una settimana, quindi è inutile mettercelo: il terreno ti dura di più") ma non è una gran differenza. L'effetto delle cellule adese l'hai avuto subito dopo lo scongelamento? Se sì tranquillizzati, è normale che molte cellule stiano male o siano morte, serve una settimana circa per avere una coltura buona. E poi per le Jurkat un po' di grumi tra di loro sono normali, se sono cresciute troppo.

Che si siano staccate mi sembra giusto, visto che non sono cellule che aderiscono al substrato ma stanno in sospensione.

Mi era sfuggita l'ultima domanda!

La fiasca va tenuta sdraiata... se possibile! Se c'è troppo volume conviene tenerla verticale, è importante che il terreno non tocchi il tappo. Per le cellule in sospensione non cambia molto, ma se hanno un volume più distribuito è meglio.

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mari82
Nuovo Arrivato



22 Messaggi

Inserito il - 08 marzo 2007 : 12:52:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mari82 Invia a mari82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Le cellule stanno meglio, sono cresciute, anche se ci sono molti cluster. L'effetto adesione l'ho avuto subito dopo lo scongelamento... quindi da quello che mi hai detto è abbastanza normale. Nel pomeriggio le spipetto un po', in modo da cercare di staccare le cellule in cluster.
Grazie mille x la tua risposta, ora sono + tranquilla...
Ciao
Marianna
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kia35
Nuovo Arrivato

Prov.: Varese
Città: Barasso


15 Messaggi

Inserito il - 08 marzo 2007 : 23:42:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kia35 Invia a kia35 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Urca mari!ho visto solo ora il tuo post!sono arrivata tardi, mi spiace!
Bhè, provo lo stesso a contribuire anche se Giuliano è già stato molto esauriente
Io lavoro con le Jurky (il loro nomignolo ) da un po di mesi.
Uso anchio l' RPMI1640 ma addizionato solo di FCS 10% e Glu 1%..non uso antibiotici..di solito quando le scongelo le piastro nella fiasca t25 e la tengo in verticale per un giorno in modo che stiano vicine e si riprendano meglio dallo scongelamento.
Anche a me formano cluster,sopratutto quando sono poche...
Bhè, so che il mio post non serve a molto dato che non ho detto niente di nuovo, xo...volevo un po parlare delle mie Jurkine...

Ciao ciao
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Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6922 Messaggi

Inserito il - 08 marzo 2007 : 23:56:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
scusa scusa? Ti formano cluster quando son POCHE? Oddio, che io mi ricordi era il sovraffollamento a farle aggregare...

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kia35
Nuovo Arrivato

Prov.: Varese
Città: Barasso


15 Messaggi

Inserito il - 10 marzo 2007 : 02:28:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kia35 Invia a kia35 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Si, in realtà a me succede in entrambi i casi: sia quando sono poche sia quando sono concentratissime...boh...Mi sono data questa unica spiegazione, almeno per quando sono poche..non può essere che quando sono 2 in croce vogliano stare vicine per superare meglio il momento critico?
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Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6922 Messaggi

Inserito il - 10 marzo 2007 : 03:25:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
può darsi... le cellule comunicano tra di loro, le comunicazioni sono ovviamente molecolari e importanti per la loro stessa sopravvivenza, quindi quando son poche soffrono e come conseguenza c'è "stress da distanza" (termine inventato da me ora), mentre se son troppe c'è ovviamente lo stress opposto. Ovviamente son tutte mie supposizioni...

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mari82
Nuovo Arrivato



22 Messaggi

Inserito il - 11 marzo 2007 : 17:59:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mari82 Invia a mari82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ragazzi vi informo che le Jurkat stanno meglio... spero che nel week end le cellule abbiano fatto le brave e che domani le trovo in forma!
Grazie mille x il vostro aiuto!
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molecola84
Nuovo Arrivato

Prov.: ol
Città: ugan


88 Messaggi

Inserito il - 02 marzo 2010 : 10:17:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di molecola84 Invia a molecola84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao ragazzi, il vostro post è fondamentale per me. Non ho mai coltivato cellule in sospensione, anzi nel mio lab sarò la prima. In realtà devo coltivare le jurkat per avere un mezzo condizionato per coltivare i macrofagi. Come faccio a ricavare il mezzo se le jurkatt sono in sospensione?
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Giuliano652
Moderatore

profilo

Prov.: Brescia


6922 Messaggi

Inserito il - 02 marzo 2010 : 11:52:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
centrifuga :-)

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MASATEAR
Nuovo Arrivato



22 Messaggi

Inserito il - 16 gennaio 2011 : 12:30:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di MASATEAR Invia a MASATEAR un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao ragazzi da domani inizio ank io a lavorare cn le jurkat mi dite come piu o meno le coltivate e quante volte a settimana cambiate il medium?è urgente!!!grazieeee
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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 16 gennaio 2011 : 13:22:42  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
ciao ragazzi da domani inizio ank io a lavorare cn le jurkat mi dite come piu o meno le coltivate e quante volte a settimana cambiate il medium?è urgente!!!grazieeee


Le informazioni più precise le trovi sul sito della ATCC .

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


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MASATEAR
Nuovo Arrivato



22 Messaggi

Inserito il - 31 gennaio 2011 : 20:30:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di MASATEAR Invia a MASATEAR un Messaggio Privato  Rispondi Quotando

ciao ragazzi ma esattamente le jurkat da dove provengono?
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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 02 febbraio 2011 : 16:56:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
http://en.wikipedia.org/wiki/Jurkat_cells

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