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 trasfezione stabile attraverso retrovirus
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ciottolina
Nuovo Arrivato

Prov.: Varese
Città: varese


35 Messaggi

Inserito il - 26 aprile 2007 : 11:11:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ciottolina Invia a ciottolina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
qualcuno mi saprebbe dire come avviene la trascrizione stabile attraverso retrovirus non riesco a trovarlo da nessuna parte..grazie mille

Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6941 Messaggi

Inserito il - 26 aprile 2007 : 11:42:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ti serve il concetto generale o la spiegazione di un protocollo?

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ciottolina
Nuovo Arrivato

Prov.: Varese
Città: varese


35 Messaggi

Inserito il - 26 aprile 2007 : 17:58:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ciottolina Invia a ciottolina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
il concetto generale
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Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6941 Messaggi

Inserito il - 27 aprile 2007 : 01:25:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Il concetto generale è presto detto. Il genoma di un retrovirus è formato da RNA, tramite retrotrascrizione diventa a DNA e alle estremità ha quelle che si chiamano LTR, Long Terminal Repeat. L'integrasi taglia queste zone facendo rimanere spaiati un paio di nucleotidi per estremità, la stessa cosa fa sul DNA cellulare ed ecco che il DNA del virus può fondersi a quello cellulare. Basta mettere invece che i geni del virus un gene che vogliamo trasfettare e quello entrerà nel DNA cellulare nello stesso modo.

Più specifico purtroppo non so andare, non ho mai fatto una trasfezione del genere quindi il discorso è puramente teorico

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Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Città: Napoli


1375 Messaggi

Inserito il - 27 aprile 2007 : 13:30:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Giuliano652

Il concetto generale è presto detto. Il genoma di un retrovirus è formato da RNA, tramite retrotrascrizione diventa a DNA e alle estremità ha quelle che si chiamano LTR, Long Terminal Repeat. L'integrasi taglia queste zone facendo rimanere spaiati un paio di nucleotidi per estremità, la stessa cosa fa sul DNA cellulare ed ecco che il DNA del virus può fondersi a quello cellulare. Basta mettere invece che i geni del virus un gene che vogliamo trasfettare e quello entrerà nel DNA cellulare nello stesso modo.

Più specifico purtroppo non so andare, non ho mai fatto una trasfezione del genere quindi il discorso è puramente teorico



tutto giustissimo. sempre da un punto di vista teorico, l'integrazione avviene in siti specifici del genoma cellulare, cioè dove c'è attiva trascrizione, quindi dove la cromatina è rilassata.
L'integrazione è mediata da una proteina virlae, l'integrasi appunto, codificata dal gene pol, da cui origina anche la polimerasi virale per evento di splicing alternativo.

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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Giuliano652
Moderatore

profilo

Prov.: Brescia


6941 Messaggi

Inserito il - 27 aprile 2007 : 15:36:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Iside


l'integrazione avviene in siti specifici del genoma cellulare, cioè dove c'è attiva trascrizione, quindi dove la cromatina è rilassata.



Specifici fino ad un certo punto. Vero che avviene dove la cromatina è rilassata, ma non c'è un una sequenza nucleotidica specifica, anzi è piuttosto casuale l'integrazione. Comunque grazie per aver specificato meglio... a tarda notte non riesco molto a ragionare bene

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Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Città: Napoli


1375 Messaggi

Inserito il - 29 aprile 2007 : 17:49:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Giuliano652

Citazione:
Messaggio inserito da Iside


l'integrazione avviene in siti specifici del genoma cellulare, cioè dove c'è attiva trascrizione, quindi dove la cromatina è rilassata.



Specifici fino ad un certo punto. Vero che avviene dove la cromatina è rilassata, ma non c'è un una sequenza nucleotidica specifica, anzi è piuttosto casuale l'integrazione. Comunque grazie per aver specificato meglio... a tarda notte non riesco molto a ragionare bene




in effetti è corretto dire che l'integrazione è casuale, ma c'è stato un trial di sperimentazione clinica in cui usando retrovirus in 2 pazienti si è avuta integrazione nello stesso sito, con conseguente amplificazione del protoncogene LMO2. Quindi sono stati mappati tutti i possibili siti di integrazione dei retrovirus, che sono centinaia, e perciò si continua a dire che l'integrazione è casuale.


[/quote]

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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 29 aprile 2007 : 18:12:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Casuale da un punto di vista operativo, anche se "da manuale" i Lentivirus
dovrebbero esercitare un'integrazione sito-specifica (ma non è detto che
il meccanismo sia chiaro, per cui al nostro occhio risulta casuale)

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


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Giuliano652
Moderatore

profilo

Prov.: Brescia


6941 Messaggi

Inserito il - 30 aprile 2007 : 13:36:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Iside


in effetti è corretto dire che l'integrazione è casuale, ma c'è stato un trial di sperimentazione clinica in cui usando retrovirus in 2 pazienti si è avuta integrazione nello stesso sito, con conseguente amplificazione del protoncogene LMO2. Quindi sono stati mappati tutti i possibili siti di integrazione dei retrovirus, che sono centinaia, e perciò si continua a dire che l'integrazione è casuale.





Grazie per l'info!

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morgan79
Utente Junior

insuperabile

Prov.: Bari


143 Messaggi

Inserito il - 04 ottobre 2008 : 10:34:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di morgan79  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di morgan79 Invia a morgan79 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
in effetti casuale fino ad un certo punto.... immaginate di essere nel nucleo al posto del DNA virale che si deve integrare.... da un lato vedete l'eterocromatina che assume strutture pazzesche complessata con proteine istoniche e associate che fanno da scudo, dall'altro lato vedete le anse di eucromatina appese alla membrana nucleare interna, libere di trascrivere e senza nessuna difesa.... voi dove vi integrereste?

il sapere non è sufficiente, bisogna applicare; il volere non è sufficiente, bisogna fare
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