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Eziad
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
36 Messaggi |
 Inserito il - 25 novembre 2007 : 18:47:00
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metodica di titolazione di virus e placche di lisi, mi occorrerebbe un protocollo di base
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Eziad |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6942 Messaggi |
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Eziad
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
36 Messaggi |
Inserito il - 25 novembre 2007 : 23:43:08
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aspetto che tu mi dia maggiori dati prima di procedere....
grazie |
Eziad |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6942 Messaggi |
Inserito il - 26 novembre 2007 : 11:27:04
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Lo scrivo qui, poi lo metto anche tra i protocolli
Infezione in doppio
Volume di infezione: 500ul x 2 dishes= 100ul di virus in 900ul di terreno; 1ml x 2 dishes= 200ul in 1800ul
Diluizioni seriali 1:10 (una in più dell'atteso)
Per l'infezione si usano solo le diluizioni seriali nel range (è inutile mettere 10^-1, di certo è troppo concentrato e non si vedrebbe alcuna placca, anzi sarebbe distrutto tutto il monostrato)
Dopo l'adsorbimento aspirare il terreno senza lavare
Sostituire il terreno con terreno-agarosio 0.6%. Importante: non fare bolle!
Aspettare la solidificazione e incubare 4 giorni rovesciato
Lettura
Soluzione crystal violetto 1% (attenzione: R22 R40 R41 R50 R53 S26 S36 S37 S39 S46 S60 S61, cioè, tra le altre cose, è cancerogeno)
Si toglie l'agar e si colore 1ml/dish di cristal violetto
Attendere 1 minuto e riscacquare con acqua corrente.
Conta delle placche alle varie diluizioni (si deve fare una proporzione per normalizzare tutto ad 1ml a causa della diluizione seriale)
Si prende la max potenza. Esempio:
10^5= nessuna placca (monostrato distrutto)
10^6= 94 e 92 (sono in doppio)
10^7= 14/12
10^8= 1/1
I numeri sono pressoché equivalenti. Prendiamo 94x10^6 --> 0.94x10^8:900ul=X:1000ul -->X=1,04x10^8pfu/ml è il nostro titolo. Ovviamente devi fare la media tra quello che hai nei due pozzetti
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Eziad
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
36 Messaggi |
Inserito il - 27 novembre 2007 : 13:27:56
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grazie  |
Eziad |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6942 Messaggi |
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aa.aa
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
Inserito il - 01 ottobre 2009 : 11:53:44
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ciao..
qualcuno mi sa spiegare cos'è la titolazione di un virus con metodo indiretto?!
grazie.. |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6942 Messaggi |
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titolazione virus
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