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ghitax
Nuovo Arrivato
Città: Torino
16 Messaggi |
 Inserito il - 09 febbraio 2008 : 11:23:51
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Ciao!!
l'esame si avvicina... ho un'altra domanda!
Come faccio a quantificare i virus attraverso l'emoagglutinazione? Nel senso: una volta che vedo che gli eritrociti non hanno sedimentato nel centro del pozzetto ma si sono "spalmati" sul fondo come faccio a quantificarli?
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 09 febbraio 2008 : 11:43:27
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| Più che quantificarli puoi calcolarti il titolo...Fai diluizioni seriali del virus e valuti l'emoagglutinazione...Il titolo ti è dato dalla diluizione maggiore con cui vedi ancora emoagglutinazione...Per quantificare il virus (probabilmente dirò una boiata) mi viene in mente di fare un saggio di inibizione dell'emoagglutinazione con quantità di Ab note se il legame Ab-virus fosse stechiometrico...Perché se valuti un effetto come questo, o le placche hai sempre risultati in unità emoagglutinati, ufp, ecc...Per avere un risultato quantitativo mi viene soltanto l conta al microscopio elettronico con particelle di latex a concentrazione nota... |
 
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
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ghitax
Nuovo Arrivato
Città: Torino
16 Messaggi |
Inserito il - 09 febbraio 2008 : 20:29:35
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Quello che so è questo:
Piastro su un tot di pozzetti una quantità uguale di eritrociti,
aggiungo diverse diluizioni di virus in ogni pozzetto,
lascio per un tot di tempo (quanto??)
se gli eritrociti hanno sedimentato formando un puntino sul fondo del pozzetto non c'è emoagglutinazione, se si è formato uno strato su tutto il fondo c'è stata emoagglutinazione.
A questo punto posso guardare qual'è la diluizione massima di virus a cui si osserva emoagglutinazione e quindi effettuare la titolazione.
Se ho capito bene quello che mi hai scritto sopra per il virus dell'influenza io posso dire che alla diluizione max a cui si osserva emoaggl. corrispondono circa 10^6 PFU.
Tutto giusto? |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
Inserito il - 09 febbraio 2008 : 21:28:59
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Quasi 
Cominciamo col tempo.
Citazione:
lascio per un tot di tempo (quanto??)
Un tot. In genere basta un'ora, ma dipende anche dalla temperatura della stanza, o se lo fai in frigo a +4, insomma, lo lasci lì finché non riesci a distinguere i pozzetti emoagglutinati e quelli non.
Citazione:
A questo punto posso guardare qual'è la diluizione massima di virus a cui si osserva emoagglutinazione e quindi effettuare la titolazione.
Se ho capito bene quello che mi hai scritto sopra per il virus dell'influenza io posso dire che alla diluizione max a cui si osserva emoaggl. corrispondono circa 10^6 PFU.
Diluendo fai diluizioni 1:2 ad ogni passaggio (indiluito, 1/2, 1/4, 1/8...), se vedi emoagglutinazione fino a 1/64, ad esempio, il titolo è 64 HAU. A quel punto sai, se stai titolando Orthomyxovirus e SOLO se stai titolando Orthomyxovirus, che 1 HAU corrisponde a circa 10^6 PFU, quindi sai che 64 HAU corrispondono a 6,4x10^7 PFU.
L'equivalenza HAU-PFU c'è per tutti i virus emoagglutinanti, ma ognuno di loro ha una equivalenza specifica (non ne sono sicuro, ma mi pare il rotavirus, ad esempio, era qualcosa tipo 2,7x10^6 PFU per ogni HAU, ma non prendere questi valori per oro colato perché non ne sono certo, sto andando a memoria) |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
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hawaiana85
Nuovo Arrivato
Prov.: Caserta
Città: Aversa
23 Messaggi |
Inserito il - 11 febbraio 2008 : 19:59:36
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ciao ragazzi. mi spieghereste a cosa serve l'emoagglutinazione e come si esegue, cioè tutto il processo iniziale, prima della titolazione?Grazie
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
Inserito il - 11 febbraio 2008 : 21:46:01
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L'emoagglutinazione E' una titolazione, e si può usare solo con virus emoagglutinanti.
Si prende una piastra da 96 (12 colonne, 8 file) pozzetti con fondo convesso e si mettono 100 ul di PBS in tutti i pozzetti tranne la prima colonna, dove andranno messi 200 ul di soluzione virale. Da ogni pozzetto della prima colonna si presevano 100 ul e si passano al pozzetto successivo, e si ripete per il successivo andando fino alla fine facendo diluizioni 1:2, e buttando gli ultimi 100 ul avanzati. In ultimo si aggiungono 100 ul di sangue per ogni pozzetto e si aspetta "un tot" per vedere cosa succede. Se ad una data diluizione viene fuori un puntino in fondo al pozzetto allora non ha agglutinato, se invece mettiamo caso alla diluizione 1:64 c'è un tappeto rosso sul fondo allora è agglutinato, e se è l'ultimo pozzetto che presenta questo tappeto allora il titolo sarà 64 HAU (unità emoagglutinanti) |
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ghitax
Nuovo Arrivato
Città: Torino
16 Messaggi |
Inserito il - 12 febbraio 2008 : 08:50:59
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Grazie a tutti!il mio esame di microbiologia è andato benissimo!!
alla prossima!
ciaoooo |
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