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 contaminazione in colture primarie?
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elly_
Utente Junior

brain blu


400 Messaggi

Inserito il - 18 settembre 2008 : 17:15:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di elly_ Invia a elly_ un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
sto allestendo colture primarie corticali. dopo un paio di giorni dopo aver piastrato le cellule al microscopio ho osservato dei pallini neri quasi impercettibili e immobili (non ne noto al momento della piastratura). vengono via molto facilmente se lavo con terreno nuovo.
preciso che in tutti i mezzi da me usati ho aggiunto P/S e veramente tutti i crismi per evitare contaminazioni.
non formano catenelle e quindi non sono lieviti. sono talmente piccoli e non si muovono e quindi non sono neanche batteri.
allora che e'? le cellule sembrano stare bene... sono belle adese e si dividono!

nannuto
Nuovo Arrivato



33 Messaggi

Inserito il - 23 ottobre 2008 : 16:16:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di nannuto Invia a nannuto un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
guarda non ti so dire esattamente cosa siano i puntini che tu vedi, ma lavorando da un pò con cellule, sebbene di tutt'altro tipo, che crescono in adesione, noto anch'io ogni qualvolta le tripsinizzo, la comparsa di tali particelle che vanno via facilmente cambiando il terreno. Credo ormai si tratti di una specie di prodotto di scarto che le cellule in adesione riliasciano nel momento in cui vengono staccate, anche perchè se ci fai caso, tenedole solo in crescita, quindi senza staccarle, non si osseva la comparsa di tali sostanze.Vai tranquilla pertanto, non sono di sicuro contaminate. Spero di esserti stata utile!
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mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato



116 Messaggi

Inserito il - 23 ottobre 2008 : 16:28:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mattia.dinunzio Invia a mattia.dinunzio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
anche per me non sono contaminazione. da quel che so lavorando con colture primarie ma di cardiomiociti di ratto le contaminazioni piu facili da riscontrare sono funginee e non batteriche. ed una muffa in un piatto si nota molto bene. anche io non mi preoccuperei troppo....
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 23 ottobre 2008 : 21:52:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Potrebbero essere semplicemente cellule morte o residui di cellule morte.

Se vedi qualcosa del genere è probabilmente così (questo è visto con filtro DIC, non ho una foto in brightfield sorry)

Immagine:

101,11 KB

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mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato



116 Messaggi

Inserito il - 24 ottobre 2008 : 08:55:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mattia.dinunzio Invia a mattia.dinunzio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
se fossero cellule morte dovresti vederle solo nel periodo che va da quando le semini a quando fai poi il primo cambio medium. poi non dovresti piu vederle secondo me
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Giuliano652
Moderatore

profilo

Prov.: Brescia


6922 Messaggi

Inserito il - 24 ottobre 2008 : 09:19:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
se sei sospettosa puoi fare il test per vedere se è mycoplasma

Qui c'è un kit

http://www.sigmaaldrich.com/Area_of_Interest/Life_Science/Cell_Culture/Product_Lines/Reagents___Supplements/Mycoplasma_Detection.html

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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 24 ottobre 2008 : 09:31:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non necessariamente. Se stai coltivando cellule neuronali adulte (sempre che per corticali tu intenda di corteccia cerebrale...), anche dopo aver cambiato il medium è facile che continuino a morire altre cellule.

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elly_
Utente Junior

brain blu



400 Messaggi

Inserito il - 24 ottobre 2008 : 14:28:32  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di elly_ Invia a elly_ un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
non mi ero accorta che mi avevate risposto! cmq col tempo alla fine ho capito che erano debris...
per la cronaca facevo delle mixed primary coltures da cui avrei isolato diverse popolazioni cellulari, questi residui comparivano durante la crescita e prima della tripsinizzazione e non dovrebbero essere micolasmi perche' le cellule stavano bene.
scusate per il topic ma un mese fa stavo diventando matta perche' avevo poco materiale di partenza per allestire le colture e non sempre mi andava tutto liscio... ma ora le preparo alla grande!

cmq grazie!
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