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 A cosa serve lavare le cellule con PBS?
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Valentina24424
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20 Messaggi

Inserito il - 26 maggio 2009 : 01:09:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Valentina24424 Invia a Valentina24424 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
In vari protocolli di sperimentazione in vitro, alcuni dei passaggi fondamentali sono i lavaggi delle cellule con BPS.

Esempio nella colorazione Hoechst/Ioduro di propidio dove le cellule dopo essere state centrifugate vengono lavate in PBS e poi viene aggiunta tripsina e così via...

Anche nella colorazione ematossilina/eosina e in molte altre tecniche si usa il PBS.

Sapete dirmi esattamente qual'è la sua funzione?Cosa fa alle cellule?

Grazie

GFPina
Moderatore

GFPina



8329 Messaggi

Inserito il - 26 maggio 2009 : 01:52:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Beh il PBS serve semplicemente per fare i lavaggi, il punto è proprio che non fa niente alle cellule!

Poi l'utilità dipende dal protocollo che stai utilizzando, ad es. nel caso tu debba tripsinizzare le cellule devi lavarle bene con PBS per eliminare tutto l'FCS presente nel medium che inibirebbe la tripsina.
Al posto del PBS si può utilizzare HANKS che è un'altra soluzione salina bilanciata.
Nessuno poi ti vieta nel caso della tripsinizzazione di lavare le cellule con medium senza FCS, ovviamente non lo fa nessuno perchè è molto più dispendioso! Ma la cosa fondamentale in quel caso è eliminare l'FCS.

In generale è solo un lavaggio, che ti permette di eliminare cellule morte, detriti...
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11486 Messaggi

Inserito il - 26 maggio 2009 : 08:16:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Altra cosa importante è che il PBS è una soluzione isotonica, quindi le tue cellule possono starci a contatto senza problemi. Ovviamente a un certo punto dovrai mettere del medium di coltura sulle tue cellule perchè il PBS non contiene i nutrienti necessari perchè le cellule possano sopravviverci per lungo tempo.

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Giuliano652
Moderatore

profilo

Prov.: Brescia


6561 Messaggi

Inserito il - 26 maggio 2009 : 08:18:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io lavavo anche col terreno...

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Biologo Nutrizionista
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memole
Utente Junior

memole

Prov.: Brindisi
Città: brindisi


577 Messaggi

Inserito il - 27 maggio 2009 : 19:33:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di memole Invia a memole un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Questa non l'avevo mai sentita... Mi hanno sempre detto che i lavaggi vanno fatti in PBS o comunque con una soluzione salina isotonica con le cellule.
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11486 Messaggi

Inserito il - 27 maggio 2009 : 19:35:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Mi hanno sempre detto che i lavaggi vanno fatti in PBS o comunque con una soluzione salina isotonica con le cellule.

Beh... il terreno è una soluzione salina isotonica!!!

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memole
Utente Junior

memole

Prov.: Brindisi
Città: brindisi


577 Messaggi

Inserito il - 27 maggio 2009 : 19:38:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di memole Invia a memole un Messaggio Privato  Rispondi Quotando


Perdonate la gaffe.
Intendevo soluzioni simili al PBS, esclusi i terreni che so essere isotonici. Se lo dovesse scoprire la mia prof mi prenderebbe in giri per un pò...

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max81
Nuovo Arrivato



2 Messaggi

Inserito il - 27 maggio 2009 : 22:02:08  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di max81 Invia a max81 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
oltre che per rimuovere il FCS è importante usare PBS senza Ca2+ e Mg2+ prima di staccare le cellule perceh gli ioni divalenti presenti sembra che inibiscano la tripsina ed inoltre questi stessi ioni sono necessari alle proteine di adesione che tengono le cellule adese alla piastra. lavando quindi le cellule con PBS favorisci il distacco. Per lo stesso motivo di eliminare questi ioni molte tripsine sono addizionate di EDTA che agisce da chelante degli ioni.
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Giuliano652
Moderatore

profilo

Prov.: Brescia


6561 Messaggi

Inserito il - 28 maggio 2009 : 08:33:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si può usare anche il versene, che nel lab dov'ero io non aveva altri usi se non quello del lavaggio (a differenza del pbs)

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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11486 Messaggi

Inserito il - 28 maggio 2009 : 08:50:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
che nel lab dov'ero io non aveva altri usi se non quello del lavaggio

Come... non ci facevate dei cocktails?

Comunque a quanto pare Versene è un bel nome per dire PBS+EDTA!

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Giuliano652
Moderatore

profilo

Prov.: Brescia


6561 Messaggi

Inserito il - 28 maggio 2009 : 09:52:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
che dire... evidentemente avevamo soldi da spendere...

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biotech89
Nuovo Arrivato



95 Messaggi

Inserito il - 08 novembre 2017 : 17:16:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biotech89 Invia a biotech89 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Mi inserisco qui...
scusate ma il PBS può essere ipotonico?
In un protocollo che ho visto è presente il PBS "ipotonico", ed è usato in una soluzione per lisare le cellule, insieme a triton, dmso e edta.
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GFPina
Moderatore

GFPina



8329 Messaggi

Inserito il - 08 novembre 2017 : 18:51:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da biotech89

Mi inserisco qui...
scusate ma il PBS può essere ipotonico?
In un protocollo che ho visto è presente il PBS "ipotonico", ed è usato in una soluzione per lisare le cellule, insieme a triton, dmso e edta.



Sinceramente non lo avevo mai sentito.
Comunque sì, si può fare in PBS ipotonico, dato che contiene NaCl basta usarne una quantità inferiore e si ottiene una soluzione ipotonica.
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