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Discussione |
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Elis
Nuovo Arrivato
Città: To
18 Messaggi |
 Inserito il - 18 giugno 2008 : 20:21:12
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buon giorno a tutti! dovrei trovare un metodo per "velocizzare" il mio western... posso fare i gel prima e conservarli? se sì come? e per quanto tempo si conservano?
grazie mille 
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What does a fish know about the water in which it swims all its life? (A. Einstein) |
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valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
Inserito il - 18 giugno 2008 : 20:57:55
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| Io li avvolgevo prima in carta da bancone bagnata, poi con la stagnola in modo che rimanessero umidi e li conservato a 4 C per 2-3 gg, mai provato più a lungo.... |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
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biotecnologie
Nuovo Arrivato
Città: Milano
11 Messaggi |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2008 : 00:53:12
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Io faccio come Valia, spesso li preparo in serie e li conservo così, con sacchetto di plastica (tipo quelli da congelamento cibi) al posto della stagnola! Una settimana stanno di sicuro! Di più non sarebbe raccomandabile... anche se basta guardare in che condizioni è il gel, se non si è seccato!
Poi ovviamente come ti hanno consigliato ci sono kit superveloci!
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2008 : 09:31:43
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Potresti anche aumentare la velocità di corsa e trasferimento, e diminuire il tempo di blocking, incubazioni Ab e lavaggi...ma poi il western comincia a venirti zozzo... |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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Eleo
Nuovo Arrivato
Prov.: Pavia
89 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2008 : 14:04:58
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io preparavo i gel il giorno prima per il giorno dopo (solo il running gel), coprivo fino al limite dei vetri con acqua milliQ, ricoprivo di carta umida e avvolgevo il tutto in stagnola o pellicola e conservavo in camera fredda.
Per velocizzare il w.b beh dipende dall'esperimento che devi fare, ma ci si può riuscire anche in una giornata.Dopo la corsa che dura il suo tempo (io la faccio a voltaggio costante(60V per lo stacking e 100V appena entrati nel running fino a fine gel)), trasferimento di 1 ora, colorazione con Ponceau, saturazione di 1 ora in TBS-latte, primario in TBS-latte 1 ora, 15/20 minuti di lavaggio, secondario in TBS-latte 1 ora, lavaggi per 30/45 minuti, sviluppo.
Ci vuole una giornata, ma si riesce. Più veloce di così non ho mai provato!
ciao |
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nyo84
Utente Junior
Prov.: Brescia
Città: Piancogno
239 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2008 : 17:10:56
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| anche noi facciamo il gel il giorno prima,ma in realtà puoi farlo lo stesso giorno..per la corsa facciamo 100 V per lo stacking e 120 V per il running..per il trasferimento facciamo 25 min a 350 mA..poi 30 min di bloccante,1 ora di primario,30 min di lavaggi,1 ora di secondario,30 min di lavaggi e sviluppo..il tempo lo recuperi sulle parti manuali prob..tipo preparare il campione,fare il sandwich o sviluppare.. |
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa... |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2008 : 18:25:03
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Beh diciamo anche che il tempo di trasferimento dipende anche dall'apparato che si utilizza, ad es. il semi-dry è sicuramente più veloce del wet! Ma non credo che tutti siano disposti a cambiare strumentazione per velocizzare i tempi! Poi ci sono anche strumenti che promettono "blot" in 10min.
O anche metodi di rivelazione direttamente su gel (... brutta esperienza!!!  )
Di opzioni ce ne sono, ma se è solo per velocizzare senza cambiare metodica o strumentazione si può benissimo fare il gel prima e come dice nyo "recuparare tempo nelle fasi manuali"!
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Elis
Nuovo Arrivato
Città: To
18 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2008 : 21:56:12
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grazie mille a tutti per le risposte... sono alle primissime armi e quindi "recuparare tempo nelle fasi manuali" mi risulta un po' difficile!! per questo volevo prepararmi un po' di cose prima... poi a forza di fare western spero di diventare un po' più veloce e di riuscire a fare tutto in un giorno!
Per quanto riguarda i tempi di corsa, trasferimento, bloccaggio, incubazione.. quelli nn posso cambiarli perchè sono già stati "testati e validati" così... forse quando avrò un po' più di esperienza.. 
per valia e gfpina.. la carta da bancone umida... nel senso imbevuta con H2O? milliQ va bene? e se li lascio direttamente a 4C in una vaschetta sempre con acqua? proverò!!!
grazie a tutti di nuovo! |
What does a fish know about the water in which it swims all its life? (A. Einstein) |
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valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2008 : 22:17:16
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Citazione:
Messaggio inserito da Elis
per valia e gfpina.. la carta da bancone umida... nel senso imbevuta con H2O? milliQ va bene? e se li lascio direttamente a 4C in una vaschetta sempre con acqua? proverò!!!
Qualsiasi acqua va bene!
Perchè vuoi metterli direttamente in acqua? Prima di tutto è scomodo tenere in frigo una vaschetta piena d'acqua, verrebbe rovesciata nel giro di un quarto d'ora 
Poi tenerli in acqua forse è un pò eccessivo... Magari i gel diventerebbero mollicci! Meglio se li avvolgi!
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Elis
Nuovo Arrivato
Città: To
18 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2008 : 22:31:18
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ehhh già!! non ci avevo pensato!
grazie! |
What does a fish know about the water in which it swims all its life? (A. Einstein) |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 20 giugno 2008 : 00:06:01
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Si concordo con Valia! Anche come carta puoi usare altro, io uso i tovagliolini da banco, la cosa fondamentale è solo che rimangano "umidi" e non si secchino (per questo devi avvolgerli anche in plastica o stagnola!)
Per il resto... la manualità con il tempo si acquisisce!
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fede.84
Nuovo Arrivato
12 Messaggi |
Inserito il - 07 agosto 2008 : 21:14:31
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| Ma avvolgete sia stacking che running o solo il running? Avvolgete i due vetri quindi? Se lo faccio domani per lunedì rimane buono se lo metto in camera fredda? |
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valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
Inserito il - 07 agosto 2008 : 22:09:36
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Citazione:
Messaggio inserito da fede.84
Avvolgete i due vetri quindi? Se lo faccio domani per lunedì rimane buono se lo metto in camera fredda?
Si si, avvolgi i due vetri in cui hai colato sia running che stacking, senza rimuovere il pettine. Da venerdi a lunedi non dovrebbe esserci nessunissimo problema.
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byo_gio
Nuovo Arrivato
Prov.: MI
Città: Milano
66 Messaggi |
Inserito il - 08 agosto 2008 : 00:18:39
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il numero di gel pronti che ci si puo' preparare dipende dal numero di vetri che uno ha a disposizione, che tende sempre a diminuire, chissa' perche' poi....
Un'altra cosa che facevo io era preparare tanti tubi pronti per stacking o per separating (a diverse concentrazioni) con tutti gli ingredienti dentro... tranne ovviamente APS e TEMED. Resistono benissimo diverse settimane a 4 gradi.
Anche non dover stare a pipettare i diversi volumi fa risparmiare un po' di tempo. |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 08 agosto 2008 : 20:03:10
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Citazione:
Messaggio inserito da valia
... avvolgi i due vetri in cui hai colato sia running che stacking, senza rimuovere il pettine...
Citazione:
Messaggio inserito da swiss_redfox da: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=9227
... Alcuni miei colleghi tolgono addirittura già il pettine e apparentamente i pozzetti si mantengono "in forma" senza problemi!
Confermo solo che il pettine si può benissimo rimuovere!!!
Non succede assolutamente niente ai pozzetti se il gel è già ben solidificato!
Anzi, nel caso in cui più persone nel laboratorio facciano WB e ci siano più vetri che pettini, come nel mio caso, sarebbe buona regola rimuovere i pettini in modo da non ostacolare il lavoro altrui!
Io vado su tutte le furie  quando qualcuno conserva i gel con i pettini per fare il WB dopo una settimana e io devo fare un gel veloce e non trovo i pettini!!! |
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fede.84
Nuovo Arrivato
12 Messaggi |
Inserito il - 08 agosto 2008 : 21:40:03
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| Grazie, siete gentilissimi! Che figata questo sito! Si imparano davvero tantissime cose nuove!! Grazie mille a tutti! Lunedì farò sapere in che stati sono i miei due gel! |
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