-13° giorno-
Purificazione di una proteina ricombinante da estratto di E. coli
Procedimento:
A partire da un estratto grezzo, purificazione, attraverso una colonna
cromatografia per affinità, di una proteina ricombinante.
Note, risultati e conclusioni:
La proteina che vogliamo estrarre è la TgFNR ricombinante
(aggiunta di una coda di 6 istidine).
La TgFNR fa parte della famiglia delle ossido riduttasi, e in particolare
è una ferredossina NADP+ dipendente di Toxoplasma Gondii.
Questa proteina è coniugata con un gruppo prostetico FAD,
che le conferisce un colore giallo.
La coda di polistidina aggiunta alla proteina, permette la sua separazione
attraverso una procedura di affinità. Gli ioni presenti in
soluzione (Nichel Ni++), formano dei legami di coordinazione con
gli anelli imidazolici delle istidine della proteina ricombinante
e con i residui della matrice.
Una volta effettuata la separazione,
la proteina viene eluita con una soluzione contenente elevate concentrazioni
di imidazolo, il quale competerà con la proteina per il legame
con la matrice.
Microbiologia
