La Tecnica Northern viene utilizzata per misurare quantitativamente
(quanto viene espresso) e valutare la dimensione di un RNA messaggero
di un gene.
L'RNA messaggero, infatti si differenzia dagli altri RNA (RNA transfert
e ribosomiale), per la presenza di una coda di poly A.
Da un estrazione di RNA totale della cellula (lisi, centrifugazione,
DNAsi), faccio una cromatografia per affinità usando una
resina particolare: sono presente dei poly T. In questo modo posso
estrarre e purificare i miei RNA messaggeri.
Non mi resta che fare un elettroforesi
usando un gel denaturante per evitare la formazione di ibridi tra
i diversi mRNA.
Ecco che si vede una strisciata nella corrispondente regione dell'mRNA,
infatti ho mRNA di diversa lunghezza. Per vedere il mio mRNA, effettuo
un trasferimento su nitrocellulosa, poi faccio ibridare una sonda
radiottiva fatta con il gene di interesse (uso DNA
polimerasi con nucleotidi radioattivi).
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in Laboratorio
